S12020 |
链亲和素 |
| 源叶 | 生物技术级，17u/mg |
- 介绍：链亲和素（SA）是阿维丁链霉菌（Streptomyces avidinii）表达的一种小分子蛋白。本制品为127AA最佳核心结构，每分子SA结合4个生物素分子，国际比活性12~15U/mg。SA与禽类亲和素（Avidin，AV）相比特异性更强，与生物素结合后半衰期长达6h，而AV半衰期仅为1h。由于SA不含糖基且等电点接近中性，因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。
- 用途：本制品已广泛应用于制备SA-偶联酶制剂（如SA-HRP，SA-AP等），SA-偶联荧光素（即荧光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA-偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附检测（ELISA）、免疫组化、亲和色谱填料、含StrepTagII标签（8-AA寡肽）的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究、生物芯片被料等生物技术领域。
- 优点：高亲和力，高偶联效率。
- 注意事项：
- 1.冻干粉溶解后应避免反复冻融，建议分装成小包装后分别冻存。
- 2.冻干粉中含20mMNa2CO3 pH9.5的缓冲体系，若用于包被，酶标可以直接使用。若用于胶体金，最好调节pH或透析后使用。溶解后立即使用效果最好，不能4℃长期存放。
- 3.若用于ELISA包板，胶体金烘金，硝酸纤维素膜上用SA划线后需要烘干保存，包被液或缓冲液中需加入20%蔗糖作为活性保护剂。
- 【操作步骤简述】
- 一、微孔板包被
- 1、用碳酸钠缓冲溶液（pH 9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成3-10ug/ml（客户可设定梯度进行实验）
- 注意：由于SA等电点是7.4，包被不建议使用中性缓冲液
- 2、用移液器吸取100ul/孔，4℃过夜包被或者37℃包被2h；
- 3、洗涤：倒尽板孔中液体，加200ul洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干
- 4、后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程
- 若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。包被前，将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。
- 二、SA偶联磁珠
- 2.1 NHS 活化
- 1、充分混匀磁珠后，取100μl PangoBeads COOH 磁珠到1.5 ml 离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液；
- 2、取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液。重复该步骤1 次； **3、迅速加入新配制的50μl EDC 溶液和50μl NHS 溶液 （均为50mg/ml， 以上述MES 配制）到装有磁珠的离心管中，漩涡混匀使磁珠充分悬浮，室温下垂直混合30min； **4、反应结束后，加入100μl 上述 MES 溶液洗涤 2 次；（活化状态不宜长时间保存， 建议立即进行偶联）
- 2.2 蛋白偶联
- 1、将离心管置于磁性上，分离去除上清液，加入100μl蛋白溶液（25 mM MES，pH 5.0） 轻柔地混匀；（蛋白浓度在0.1-2.0mg/ml）
- 2、在室温下垂直混合反应2h，或在4℃条件下垂直混合过夜；
- 3、反应结束后将离心管置于磁分离架上，磁性分离去除上清液，加入1ml乙醇胺溶液 （3M，pH9.0）洗涤磁珠 2 次；
- 4、加1ml乙醇胺溶液（3M, pH 9.0）于离心管中，涡旋30s，将离心管置于垂直混合 仪中室温反应1-2h；
- 5、反应结束后，将离心管置于磁力架上，待固液分离后移除上清液，然后加入100μl 纯化水轻柔涡旋 30s，磁吸分离，重复该步骤 1 次；
- 6、加入适量的保存液（可根据需要来确定保存溶液的加入量，以调整偶联配体磁珠的加入适量的保存液（可根据需要来确定保存溶液的加入量，以调整偶联配体磁珠的浓度）保存于4°，如果固定的生物配体稳定，可以在保存溶液中加入0.02%（W/V）叠氮化钠作为抑菌剂。
- 外观： 冻干粉
- 敏感性： 对热敏感,易吸潮
- 储存条件： -20℃
- 用途： Applications for enzyme-labeled (HRP, AP) streptavidin: Enzyme immunoassays (EIA), including enzyme-linked immunsorbent assays (ELISA) with biotinylated antibodies Cell and tissue staining (for light microscopy) Western blotting (WB) and other membra
- 注意：部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，仅供客户参考交流研究之用。
- 3. Qingkui Fang, Limin Wang, Qi Cheng, Jia Cai, Yulong Wang, Mingming Yang, Xiude Hua, Fengquan Liu, A bare-eye based one-step signal amplified semiquantitative immunochromatographic assay for the detection of imidacloprid in Chinese cabbage samples, Analytic
- 2. Yu Wang, Xudong Zhao, Man Zhang, Xuan Sun, Jialei Bai, Yuan Peng, Shuang Li, Dianpeng Han, Shuyue Ren, Jiang Wang, Tie Han, Yifei Gao, Baoan Ning, Zhixian Gao, A fluorescent amplification strategy for high-sensitive detection of 17 β-estradiol based on EXP
- 1. 万涛 熊伟杰 王云涛. RLIP76和CD44在胃癌患者血清和组织中表达及其临床意义[J]. 转化医学杂志 2020 v.9;No.47(02):41-45.
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质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子量 (g/mol)
