- 介绍：
原液制备
1. 蛋白准备为了获得最佳标记效果，请将蛋白 (抗体)必须在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和铵离子的pH8.5缓冲液中溶解，浓度配制为 2 mg/mL。若 pH 低于 8.0，则用 1 M 碳酸氢钠进行调整。蛋白浓度低于 2 mg/mL，标记效率会大大降低，为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。2. 染料准备将无水 DMSO 稀释 CY 染料，制成 10 mM 储备溶液。通过玻璃管或旋涡充分混合。CY 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存，不能反复冻融。（荧光染料溶液稳定性比较差，建议最好现配现用，或者配制少量储备液）3. 染料工作液用量计算标记反应所需的 CY 染料用量取决于要标记蛋白的用量，CY 染料与蛋白的最佳摩尔比为 10 左右。例：假如所需标记蛋白为 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000),用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg CY5 染料，则所需 CY5 体积为 3.48 μL，详细计算流程如下 (以 CY5 为例) ：1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) ×mL (IgG) / MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol2) mmol (CY5 ) = mmol (IgG) ×10 =6.7×10-6 mmol×10 = 6.7×10-5 mmol3) μL (CY5 ) = mmol (CY5 ) ×MW (CY5 ) / mg/μL (CY5 ) = 6.7×10-5 mmol× 519.12 mg/mmol / 0.01 mg/μL =3.48 μL (CY5)使用方法1. 标记反应1) 取算好体积的新鲜配制的 10 mg/mL CY 染料缓慢加入到 蛋白样品溶液中，轻轻摇匀混合，然后短暂离心将样品收集在反应管底部。切忌剧烈混匀，防止蛋白样品变性失活。2) 将该反应小管置于避光处，在室温条件下轻轻摇晃孵育 60 分钟，每隔 10–15 分钟，将反应小管轻轻颠倒几次，以充分混合两种反应物，提高标记效率。
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本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为：
质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子摩尔量 (g/mol)
