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基 因 型Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)简 要 说 明发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染 大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有卡那霉素抗性。 生物生产的Ar.A4化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测,转化效率>104 cfu/μg DNA。 操 作 说 明1.取-80℃保存的Ar A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀,依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。3. 冰浴中拿出放室温,加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基,于 28℃振荡培养 2小时。4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天注 意 事 项1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀,务必使质粒快速、均匀分散开,与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或降低涂板的菌量。4. Ar.A4具有卡那霉素抗性,不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。
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- 储存条件: -80℃
- 用途: 发根农杆菌感受态细胞
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质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子摩尔量 (g/mol)