产品介绍

氰化溴化物活化的琼脂糖是一种用乳糖稳定的冻干粉，可用于亲和层析、蛋白层析、蛋白相互作用、抗体标记、抗体修饰以及将抗体附着于琼脂糖珠上。偶联方法(1) 液配制偶联液:0.2M NaHCO0.5M NaCl,pH8.0:封闭液:0.1M Tris;pH8.5;清洗液D:0.1MZ酸乙酸钠,0.5M NaCl,pH3.0;清洗液2:0.1M Tris-HCL,0.5M NaClpH8.0。必须尽量缩短清洗和偶联之间的时间间隔，因此建议在偶联前准备所有需要的溶液。缓冲液均需先过滤再使用。(2)蛋白预处理每毫升的介质可偶联10~12mg的蛋白。干粉状蛋白可用偶联液溶解蛋白,液体状蛋白需将其缓冲液置换为偶联液。(3)清洗取适量丙酮保存的凝胶放在玻璃过波漏斗过波掉丙酮回收，用纯水清洗4倍胶体积，再用4倍胶体积的偶联液洗涤。(4)偶联偶联比(凝胶:偶联样品液)=1:2(:V)洗涤完成后，快速将清洗后抽干的凝胶加到蛋白溶液中，揽匀，pH调到8.3,于室温振荡反应2h,转速70rpm。(5)封闭反应完成后收集偶联样品,可测偶联样品液中蛋白浓度(紫外吸收法),计算偶联率。收集的偶联样品用超纯水清洗两遍,封闭液清洗一遍，再加入2倍胶体积的封闭液，室温振荡到闭1h,以消除转余活性基团。(6) 清洗取封闭后的凝胶，用超纯水清洗3遍,清洗液D、清洗液(2重红清洗3遍，超纯水清洗3遍，蛋白偶联完成，该亲和介质可使用。(7)保存20%的乙醇,4°C保存。