- 介绍:
基 因 型F`[ proA+B+ lacIq ZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi -1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)简 要 说 明NovaBlue(DE3)来源于K12菌株,具有极高的转化效率,是转化效率最高的原核表达菌株,可同时用于普通质粒的构建和蛋白的原核表达。NovaBlue(DE3)菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区,使得NovaBlue(DE3)菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,广泛用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。NovaBlue(DE3)菌株具有四环素抗性,endA1和recA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取;lacZΔM15的存在使NovaBlue(DE3)可用于蓝、白斑筛选。生物生产的NovaBlue(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达109cfu/μg DNA。操 作 说 明1. NovaBlue(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上(若质粒浓度较高,也可稀释后涂板,务必保证能在平板上挑到单克隆菌落)。5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。注 意 事 项1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。3. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
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- 储存条件: -80℃
- 用途: 表达感受态细胞
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质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子量 (g/mol)