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- 介绍:
本品为绿色荧光标记的溶酶体探针,具有504/511nm的最大激发/发射波长。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供。
使用方法(仅供参考)
使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。
1.工作液的配制
利用培养基或合适的缓冲液将1mM 储存液稀释至工作浓度,推荐工作液浓度为50-75nM;
【注意】:1)为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。2)若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育,会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
2.染色
2 .1 对于贴壁细胞1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。
2)待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30min~2h(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
【注意】:对Lysotracker Green DND-26内化过程的动力学研究表明,活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应Alkalizing effect”,也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体pH值提高。建议仅当该探针于37℃孵育细胞1-5min才可用作pH指示剂。
3)利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。
2.2 对于悬浮细胞
1)离心,吸除上清。
2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育30min~2h(具体时间需根据细胞类型而定)。
3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液重悬细胞。
4)置于荧光镜下观察。若染色不够充分,建议增加染料浓度或加长染色时间。
【注意】:对于悬浮细胞,也可将细胞贴附于经BD Cell-Tak处理过的盖玻片上,然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
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本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系,公式为:
质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子摩尔量 (g/mol)