Western Blot 中的“关键一步”漂洗_化学常识

　　在 Western Blot 实验中，我们常常关注抗体孵育、蛋白上样这些环节，却容易忽略一个看似简单但非常重要的步骤——漂洗。今天我们就来聊聊这个“不起眼”的漂洗步骤，为什么它如此重要？

漂洗，远不止“冲一冲”那么简单

缓冲液是基础：常用的 TBST（Tris - HCl 缓冲液 + NaCl + Tween - 20）和 PBST（PBS 缓冲液 + Tween - 20），就像漂洗的“魔法药水”。Tween - 20 这个表面活性剂，能巧妙地破坏抗体与膜表面的非共价结合，让游离抗体乖乖“离场”。

洗掉谁？洗多少？

漂洗的核心任务是移除未结合的一抗/二抗、封闭剂残留，同时保护特异性结合。洗过头，信号可能被洗掉；洗不够，背景必然脏乱差。

时长 & 次数：没有绝对标准！一抗后和二抗后的漂洗要求不同（二抗后通常需更充分）。常见操作：每次5-10分钟，重复3-4次。关键：轻柔晃动！剧烈震荡可能损伤膜或洗脱目标蛋白。

温度有影响：室温最常用。若背景顽固，可尝试4°C延长漂洗，但需注意信号强度可能减弱。

常见漂洗翻车现场

背景深似海：多半是漂洗不彻底（次数少、时间短、缓冲液失效、晃动不足）。

信号弱如丝：可能漂洗过度（时间太长、次数太多、吐温浓度过高、过于剧烈）。

膜上现“花纹”：漂洗不均匀（膜堆叠、未完全浸没、摇床不平）。

洗出SCI级结果的秘诀

1. 充分浸润：确保膜完全浸没在缓冲液中，避免膜相互粘连。

2. 温柔摇摆：使用摇床，保持轻柔、持续的晃动。

3. 时间灵活调整：根据背景情况微调每次漂洗时长和总次数。背景脏？适当增加一次或延长单次时间（先小范围试）。

4. 滤纸吸干：漂洗结束，用干净滤纸轻轻吸去膜上多余液体（勿擦拭！），再进行下一步。

　　Western Blot 实验中的漂洗步骤，虽不张扬却举足轻重。每一次精准的操作，都是向准确实验结果迈进的坚实一步。希望科研小伙伴们在 WB 实验的路上，用好漂洗这个“利器”，收获理想的数据！

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