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- 介绍：
基因型:F- mcrA (mrr-hsdRMS-mcrBC) 80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 (ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG简 要 说 明High5TM系列DH10B感受态细胞只能用于电击转化而不能用于热激转化。DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA ，无论真核生物还是原核生物的基因组DNA都能被高效的转入DH10B中。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80dlacZ∆M15标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。High5TM系列DH10B感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。High5TM系列DH10B感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19质粒检测，转化效率>1010cfu/μg。 操 作 说 明1. 0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。2. 取-80℃保存的High5TM 系列DH10B感受态细胞放入冰浴中融化，加入1 μl目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀立即插入冰中。A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒pUC19；B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。3. 用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=2.4 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，使用者也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。5. 立即 向电击杯中加入1ml不含抗生素的无菌培养基 S.O.C.，混匀后转移到空50ml管中，并用1ml SOC轻柔冲洗电转杯并转移到50ml管中，另补加3ml SOC培养基， 37℃，200 rpm复苏60分钟。6. 5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13h。注 意 事 项1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10。2.当质粒不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。3.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。4.对于连接产物转化，最好转化前用乙醇沉淀DNA后适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加打火的风险。5.混入质粒时应轻柔操作。6.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
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- 储存条件： -80℃
- 用途： 克隆感受态细胞
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质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子摩尔量 (g/mol)
