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- 介绍：
基 因 型 F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+, KmR 简 要 说 明 M15(pREP4)蛋白表达菌株含有pREP4质粒，该质粒通过p15A复制子启动复制，可以与许多原核表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中；同时该质粒携带lac I基因，可高效表达lac 抑制蛋白，在IPTG诱导前可抑制目标蛋白的本底表达，特别适合毒性基因的表达。M15(pREP4)菌株是PQE系列质粒的配套菌株，特别适合PQE系列质粒或由E.coli T5 启动子诱导表达的质粒的蛋白表达。pREP4质粒赋予该菌株卡那霉素抗性。生物生产的M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达2×108cfu/μg DNA。 操 作 说 明 1. M15(pREP4)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。 2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。 5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养，M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时，需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。 注 意 事 项 1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 2. M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时，需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。 3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
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- 储存条件： -80℃
- 用途： 表达感受态细胞
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质量 (mg) = 浓度 (mM) x 体积 (mL) x 分子摩尔量 (g/mol)
