随着秋冬时节来临,新型冠状病毒又掀起了一轮新的传播
11月11日0—24时,31个省(自治区、直辖市)和新疆生产建设兵团报告新增确诊病例98例。其中境外输入病例19例(上海6例,云南5例,黑龙江2例,广东2例,内蒙古1例,浙江1例,福建1例,广西1例);本土病例79例(辽宁52例,均在大连市;河南12例,其中郑州市6例、周口市6例;北京6例,其中海淀区4例、朝阳区2例;黑龙江5例,均在黑河市;河北2例,均在辛集市;江西1例,在上饶市;云南1例,在德宏傣族景颇族自治州),含16例由无症状感染者转为确诊病例(河南11例,辽宁5例)。
新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,2019-nCoV),简称“新冠肺炎”目前,对全球公共卫生安全构成了巨大威胁!
什么是病毒?
病毒(virus): 是由一个核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质构成的非细胞形态,靠寄生生活的介于生命体及非生命体之间的有机物种,它既不是生物亦不是非生物,目前不把它归于五界(原核生物、原生生物、真菌、植物和动物)之中。病毒可以感染几乎所有具有细胞结构的生命体。一个保护性外壳包裹的一段DNA或者RNA,借由感染的机制,这些简单的有机体可以利用宿主的细胞系统进行自我复制,但无法独立生长和复制 。
冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具囊膜(envelope)、基因组为线性单股正链的RNA病毒,是自然界广泛存在的一大类病毒。2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2 [3] ,引发新型冠状病毒肺炎COVID-19 [4] )是目前已知的第7种可以感染人的冠状病毒,其遗传物质为RNA; RNA和RNA之间重组率非常高,病毒出现变异正是由于这种高重组率。
检测原理
核酸检测的物质是病毒的核酸。核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的核酸,来确定是否被新冠病毒感染。因此一旦检测为核酸“阳性”,即可证明患者体内有病毒存在。新冠病毒感染人体之后,首先会在呼吸道系统中进行繁殖,因此可以通过检测痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判断人体是否感染病毒。所以说,核酸检测阳性可以作为新型冠状病毒感染确诊的金标准。
核酸检测( RT -PCR荧光法)是当前检测“新冠肺炎” 的主要方法,其基本原理是:根据病毒的核酸序列设计特异性的引物用于扩增对应的核酸片段,同时高度特异性的TaqMan探针可与对应的核酸片段进行结合,并在Taq酶外切酶活性作用下发生水解,产生荧光信号,根据荧光信号与扩增循环数之间的关系可得到实时扩增曲线。标本处理前必须进行56°C 30min病毒灭活预处理,方可进行后续处理。目前各大商业公司试剂盒中以2019-nCoV的RdRP基因(位于ORF 1ab读码框)、E基因和N基因为检测对象,从而实现对2019-nCoV核酸的检测。
核酸诊断检测,首先要进行样本采集,病毒采样管是检测流程中最重要的环节之一。病毒采样管的及时供应,也是疫情防控的重要保障。病毒采样管最主要由拭子+采样管+病毒保存液组成。
检测步骤:
病毒保存液一方面直接裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解,另外一方面,又能让病毒的蛋白变性,失去活性而“死掉”,不再有传染性,提高运输和检测阶段的安全性。
广泛使用的病毒保存液有两种,一种是以运送培养基为基础改良的病毒维持液,另一种则为核酸提取裂解液改良的保存液。
病毒保存液中,用量最大的成分是胍盐,核酸提取是指利用物理、化学等方法将核酸从样品中分离出来的过程。分离得到高质量的核酸是分子生物学研究的关键步骤。盐酸胍、异硫氰酸胍和蛋白酶K都具有使蛋白质变性的作用,在核酸提取中有广泛的应用。
盐酸胍,CAS号:50-01-1,是一种白色结晶粉末。盐酸胍是核酸酶的强抑制剂,但并不是强变性剂,它在核酸提取中的主要作用是使蛋白质变性并抑制酶活性。盐酸胍能够快速破坏细胞膜,使得蛋白质变性沉淀,从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕。盐酸胍的溶解能力和变性能力相对较强,但在酸性条件下易产生沉淀、可能对蛋白质离子交换色谱有干扰等缺点。
异硫氰酸胍,CAS号:593-84-0,是一种白色结晶性粉末。异硫氰酸胍是一类强力的蛋白质变性剂,无RNA酶和DNA酶活性。在核酸提取中,异硫氰酸胍能够迅速破碎细胞或病毒释放核酸,抑制细胞释放出的核酸酶,保证核酸一级结构的完整性。新型冠状病毒是一种RNA病毒,各种RNA病毒的核酸由于自体降解和生物酶介导的降解,是较难稳定保存的生物分子。而异硫氰酸胍是一类强有力的蛋白质变性剂,且具有无RNA酶和DNA酶活性的特点。采样管中加入异硫氰酸胍能够破坏RNA酶的分子结构,使样本中可能存在的核酸酶失活,起到稳定保存病毒样本的作用。作为核酸裂解液的主要成分,异硫氰酸胍能迅速破碎病毒,使核蛋白与核酸迅速分离,同时抑制释放出的核酸酶活性,保证核酸一级结构的完整性,提高核酸提取效率;
目前,源叶生物可以提供主要相关原料如下:
新冠病毒检测及研究相关原料 |
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功能 |
具体产品 |
裂解RNA,蛋白灭活,促进PCR |
S30260 异硫氰酸胍593-84-0 99% |
S30259 盐酸胍50-01-1AR,99% |
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S11080 二硫代苏糖醇3483-12-3BR,99% |
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S15012 十二烷基硫酸钠151-21-3 |
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S15011 十二烷基肌氨酸钠 137-16-6 试剂级,95% |
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S10085 蛋白酶K39450-01-630u/mg |
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病毒生存需求 |
S16001 三羟甲基氨基甲烷 77-86-1 AR,99.9% |
R20049 Hanks平衡盐溶液(1×HBSS,含酚红) |
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R20064 Earle's平衡盐溶液(1×EBSS,无钙镁糖酚红) |
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S16013 N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸) 7365-45-9 BR,99% (HEPES) |
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R20069 HEPES溶液(1mol/L,pH6.8-8.0,非无菌) |
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稳定病毒蛋白 |
S11022 D(十)-无水葡萄糖 50-99-7 AR,99% |
MP20001 胎牛血清 100ml 4 |
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S12012 牛血清白蛋白 9048-46-8 BR,98% |
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S12018 人血白蛋白 70024-90-7 BR,96-99% |
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R22760 牛血清白蛋白溶液(20% BSA) |
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S12014 牛血清白蛋白(第五组份)9048-46-8BR,98% |
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抑制细菌 |
R22049 l 酚红指示剂(6.8-8.0) |
R20016 青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗) |
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S17024 庆大霉素硫酸盐1405-41-0USP级,590u/mg |
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R20013 硫酸庆大霉素溶液(Gentamycin Sulfate,50mg/ml)10ml |
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R20017 青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗) |
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S17024 庆大霉素硫酸盐 1405-41-0 USP级,590u/mg |
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S17056 多粘菌素B硫酸盐 1405-20-5 USP级,6000IU/mg |
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金属离子螯合剂 |
S30032乙二胺四乙酸二钾盐 二水合物25102-12-9超纯,99% |
S30026乙二胺四乙酸二钠盐6381-92-6AR,99% |
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S30419 8-羟基喹啉148-24-3AR,99.5%(金属离子的络合剂和萃取剂) |
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沉淀法提取RNA |
S11042 糖原BR,河蚌提取99% |
S18128 核糖核酸(酵母) 63231-63-0 |
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分解RNA |
S10068 核糖核酸酶(牛胰) 9001-99-4 高纯,60u/mg |
荧光检测 |
S10118 Taq酶 9012-90-2 BR,2-5u/ul,99% |
更多详情详见官网:www.shyuanye.com
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